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ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (BT474)
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RA-CK04
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产品概述

背景:

       抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)是免疫系统对抗病毒感染及肿瘤疾病的一种重要免疫防御机制。抗体通过与靶细胞表面抗原特异性结合,招募如自然杀伤(Natural killer, NK)细胞等效应细胞杀死靶细胞。NK细胞表面表达FcγRIIIa蛋白,是一种抗体Fc区域的受体,能识别并结合抗体的Fc端,从而使NK细胞结合到靶细胞周围。一旦Fc受体与抗体的Fc区域结合,NK细胞就会释放细胞因子和细胞毒性颗粒,进入靶细胞触发细胞凋亡。传统的ADCC检测方法是利用外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)或者从其中分离得到NK细胞作为效应细胞进行检测,该方法的效应细胞较难获取,且方法变异性大、操作繁琐。

       Rhinogen®ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (BT474) 报告基因检测系统包含抗Her2抗体ADCC功能检测所需的靶细胞BT474细胞及抗Her2抗体对照品。如果您的待测抗体能识别BT474细胞上的不同表面抗原,该试剂盒仍旧适用于您抗体的ADCC活性检测。

       Rhinogen®ADCC Reporter Bioassay是一种生物发光报告基因检测方法,用于检测抗体的ADCC生物学活性。其作用机理基于NFAT(Nuclear factor of activated T-cells)反应通路(图1)。本系统采用基因工程改造的Jurkat细胞作为效应细胞,该细胞稳定表达FcγRIIIa受体(V158高亲和力突变体)和由NFAT应答元件驱动表达的萤火虫萤光素酶。抗体通过与效应细胞表面FcγRIIIa的结合,激发细胞内NFAT反应元件,NFAT反应元件则驱动萤火虫荧光素酶的表达。荧光素酶活性通过生物发光进行定量。

1.Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay原理图

产品规格:

名称

    规格

货号

Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay, Complete Kit (BT474)

    1kit

RA-CK04

试剂盒组分:

 

 

•       ADCC Bioassay效应细胞(5 × 106cells/ml),1 × 1ml

 


•       BT474靶细胞(2 × 106cells/ml),1 × 1ml

•       Her2抗体对照品,1 × 10μg



特点:

       Rhinogen®ADCC报告基因检测系统提供的ADCC生物学活性检测方法操作具有操作简便(图2)、变异性低、灵敏度高等特点,并可与多种不同的靶细胞搭配使用。

       1. 原理明确:基于抗体结合细胞对效应细胞FcγRIIIa受体信号通路的激活;

       2. 应用广泛:治疗性抗体药物的Fc功能学研究和产品质控、ADCC作用机制研究;

       3. 操作简便:检测过程简单,检测试剂易用;

       4. 适用性广:该系统已完成针对悬浮或贴壁的多种靶细胞的适用性验证,效果良好;

       5. 灵敏度高:可灵敏的检测到抗体糖型的改变;

       6. 稳定性好:传代30次仍可稳定灵敏检测,数据重复性好。


       Rhinogen®ADCC报告基因检测系统的各项特性使得其可作为抗体筛选、抗体糖基化修饰等研究的有效手段。同时,该法可作为抗体药物ADCC活性的常规检测方法及批签发检测指标。

2. Rhinogen® ADCC Reporter Bioassay检测流程图

运输及存储:

       

       运输方式:干冰运输

              存:到细胞后,请立即将ADCC Bioassay效应细胞及BT474靶细胞冻存管转移至-140°C以下的保存条件长期保存。抗Her2抗体请保存在-20℃。





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